WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!


Pages:     | 1 |   ...   | 6 | 7 || 9 | 10 |   ...   | 12 |

53 Всероссийская научная школа-конференция для молодежи Первый опыт применения комбинированного клеточного трансплантата на основе мультипотентных стромальных клеток (МСК) из жировой ткани у пациентов с выраженным дефицитом костной ткани в области верхней и нижней челюстей Алексеева И.С.1, Волков А.В.2, Кулаков А.А., Григорьян А.С.1, Ржанинова А.А.2,3, Арутюнян И.В.2,3, Гольдштейн Д.В.2, ФГУ «ЦНИИС и ЧЛХ» Росмедтехнологий, Москва ЗАО «РеМеТэкс», Москва Медико-генетический научный центр РАМН, Москва Применение в клинической практике различных остеопластических материалов не всегда приводит к образованию необходимого объема костной ткани. Высокотехнологичным альтернативным имплантационным материалом может стать тканеинженерная конструкция (ТИК), содержащая аутологичные клетки пациента и биорезорбируемый матрикс различной природы. На базе ФГУ «ЦНИИС» Росмедтехнологий совместно с ЗАО «РеМеТэкс» проведено пилотное клиническое исследование новой биомедицинской технологии по восстановлению костных дефектов и дефицита костной ткани верхней и нижней челюстей (по протоколу RMosteo-AT, ЗАО «РеМеТэкс»). Клинический протокол костной пластики для дентальной имплантации состоит из нескольких этапов: создание с помощью 3D прототипирования и 3D компьютерного моделирования из биорезорбируемого частично деминерализованного костного матрикса модели костного блока, которая анатомически соответствует костному дефекту у пациента;

заселение матрикса аутологичными МСК из жировой ткани, преддифференцированными в остеогенном направлении; трансплантация ТИК в место дефекта. В исследование было включено 7 пациентов (4 женщины и 3 мужчины в возрасте от 29 до 55 лет). У всех пациентов имелась выраженная атрофия костной ткани в области ранее утраченных зубов: уменьшение высоты и ширины альвеолярного отростка. Всем пациентам было проведено устранение дефектов костной ткани с помощью трансплантации ТИК. Клинические исследование продемонстрировало отсутствие реакций на трансплантированную ТИК со стороны ложа трансплантата и слизистой оболочки полости рта. Выявлено ускорение сроков заживления операционной раны без врастания слизистой в трансплантат, замещение в течение 3 – 6 месяцев ТИК в организме пациента на собственную костную ткань, количество которой достаточно для установки имплантатов и первичной фиксации уже через три — четыре месяца после трансплантации ТИК.

54 Всероссийская научная школа-конференция для молодежи Интракоронарная трансплантация мультипотнетных стромальных клеток при постинфарктном кардиосклерозе Фатхудинов Т.Х.1,3, Слащева Г.А.2, Большакова Г.Б.3, Хохлова О.Н.2, Арутюнян И.В.1, Илюшкина И.А.2, Мурашев А.Н.2, Гольдштейн Д.В.ЗАО «Реметэкс», Москва Филиал ИБХ им. ак. М.М.Шемякина и Ю.А.Овчинникова РАН, Пущино НИИ морфологии человека РАМН, Москва Трансплантация мультипотентных стромальных клеток (МСК) костного мозга является одним из перспективных методов лечения хронической сердечной недостаточности. Меченные PkH26 (Sigma) аутогенные МСК, 5 млн клеток в 1 мл физ. раствор, выделенные по стандартной методике, вводили интракоронарно крысам (n=20) через 30 суток после перенесенного острого инфаркта миокарда с реперфузией. В контрольной группе (n=20) вводили физ. раствор в равном объеме. Клетки вводили в полость левого желудочка при одновременном пережатии аорты. Через 2 и 4 недели после трансплантации в сердце маркированные клетки обнаруживали только в рубцовой ткани 55,5±17,7 (49,5 % от общего числа выявленных клеток) и 34,5±13,(38,7 %) клеток в поле зрения. В селезенке также наблюдали большое количество клеток 52,3±9,5 и 43,8±13,1, тогда как в печени и легких выявляли единичные клетки — 2,9±1,9 и 1,4±1,7 через 2 недели и 7,6±3,1 и 3,1±4,через 4 недели. В сердце трансплантированные клетки были выявлены только в рубцовой ткани и имели фибробластоподобный фенотип, они не дифференцировались ни в кардиомиоциты, ни в клетки кровеносных сосудов.

Через 2 недели рубец в опытной группе составлял 4,5±4,7 %, но достоверно не отличался от этого показателя в контрольной группе 7,1±4,1 %. Через недели относительный размер рубца на этих сроках был достоверно меньше в опытной группе 4,8±3,0 %, в контрольной группе этот показатель составил 7,1±3,3 %. Индекс дилатации левого желудочка на всех сроках в группе с введением клеток был достоверно меньше, чем в контрольной группе. Кроме того, индекс дилатации существенно уменьшился через 4 недели по сравнению с предыдущим сроком наблюдения — 15,2±10,0 % и 8,0±4,4 % соответственно. В исследуемые сроки в опытной группе достоверно толще была стенка ЛЖ в области рубца, чем в контрольной группе. Таким образом, трансплантированные МСК мигрируют в область рубца, стимулируют обратное ремоделирование левого желудочка, но не дифференцируются в кардиомиоциты и клетки кровеносных сосудов.

Исследование выполнено при поддержке Федерального агентства по науке и инновациям РФ, ГК № 02.512.11.2336.

55 Всероссийская научная школа-конференция для молодежи Тканеинженерные конструкции на основе мультипотентных стромальных клеток костного мозга и пористых полилактидных носителей Бухарова Т.Б.1,3, Антонов Е.Н.2, Фатхудинов Т.Х.1,4, Попов В.К.2, Волков А.В.1,4, Попова А.В.2, Баграташвили В.Н.2, Гольдштейн Д.В.1,ЗАО «РеМеТэкс», Москва Институт проблем лазерных и информационных технологий РАН, Троицк Медико-генетический научный центр РАМН, Москва НИИ морфологии человека РАМН, Москва Поиск материалов и методов изготовления носителей тканеинженерных конструкций (ТИК) для быстрого и эффективного восстановления протяженных дефектов костной ткани является одним из важнейших направлений тканевой инженерии. Применение методов быстрого лазерного прототипирования позволяет синтезировать матрицы-носители из апробированных в медицинской практике материалов (эфиров органических кислот) с заранее заданной структурой в соответствии с архитектоникой восстанавливаемой ткани. Использование компьютерного моделирования обеспечивает воспроизводимость параметров получаемых структур и позволяет изготавливать носители, соответствующие по форме геометрии дефекта.



В работе была изучена биосовместимость носителей из полимолочной кислоты, полученных методом поверхностно-селективного лазерного спекания. Для изготовления ТИК использовали мультипотентные стромальные клетки (МСК) костного мозга и носители в виде дисков диаметром 12 мм и высотой 4мм, с порами размером 0,6х0,6 мм. Клетки культивировали на носителе 7 суток, их количество составляло ~ 300 тыс. клеток, витальность — не менее 80 %. МСК костного мозга прикреплялись и распластывались как на поверхности носителя, так и в порах. С помощью МТТ-теста показано отсутствие цитотоксического эффекта носителей.

Через 30 суток после трансплантации ТИК под кожу крысам внутри конструкции наблюдали образование рыхловолокнистой соединительной ткани с большим количеством кровеносных сосудов и высокой концентрацией незрелых клеток-предшественников. При этом в зоне трансплантации отсутствовали выраженная воспалительная инфильтрация, неопластические и другие патологические изменения.

56 Всероссийская научная школа-конференция для молодежи Морфологические изменения в парауретральной области при введении тканеинженерной конструкции на основе стромальной фракции жировой ткани Макаров А.В.1,2, Арутюнян И.В.1,3, Гольдштейн Д.В.1,ЗАО «РеМеТэкс», Москва ГУ НИИ Морфологии человека РАМН, Москва ГУ Медико-генетический центр РАМН, Москва В современной медицинской практике широко используются методы введения препаратов, восполняющих объём в области дефицита собственной соединительной ткани. Для локального формирования соединительной ткани в парауретральной области впервые предложено использовать инъекционную форму тканеинженерной конструкции (ТИК) на основе мультипотентных стромальных клеток (МСК) из жировой ткани и желатиновой губки.

В экспериментальном исследовании использовали самок крыс Вистар, которым парауретрально вводили 0,5 мл суспензии, содержащей различные тканеинженерные конструкции. ТИК получали путем заселения желатиновой губки аутологичными, аллогенными и девитализированными МСК из жировой ткани; в качестве контроля — использовали введение только желатиновой губки.

Для оценки морфологических изменений в области трансплантации проводили морфометрическое исследование матрикса конструкции, клеток, инфильтрирующих область введения конструкций, коллагеновых волокон; кровеносных сосудов. Морфологическое исследование показало, что при использовании тканеинженерной конструкции, содержащей живые аутологичные клеточные культуры стромальной фракции жировой ткани, происходит формирование наибольшего количества коллагеновых волокон в области введения, при этом отмечена прямая корреляция между наличием трансплантированных клеток, количеством фибробластов и фибоцитов в области введения и площадью образованных коллагеновых волокон. Сравнительное исследование ТИК, содержащей девитализированные клеточные культуры показало незначительное образование коллагена в области введения, статистически значимо не отличающееся от группы, в которой вводился только матрикс без клеточной культуры.

Таким образом, данные, полученные в ходе экспериментального исследования, позволяют говорить об эффективности использования тканеинженерной конструкции, содержащей аутологичную клеточную культуру стромальной фракции жировой ткани для локального формирования соединительной ткани.

57 Всероссийская научная школа-конференция для молодежи Применение тканеинженерной конструкции для лечения ложных суставов Шустров С.А.1,2, Волков А.В.1,2, Арутюнян И.В.1,3, Петров М.А.4, Ржанинова А.А.1,3, Большакова Г.Б.2, Гольдштейн Д.В.1, ЗАО «РеМеТэкс», Москва НИИ морфологии человека РАМН, Москва Медико-генетический научный центр РАМН, Москва ГУ ВПО РГМУ, Кафедра детской хирургии, Москва На развитие патологического процесса в области повреждения кости главным образом влияет отсутствие грануляционной ткани, содержащей малодифференцированные клетки, а не низкий уровень местного кровообращения или недостаток факторов роста TGFb, PDGF и BMP 2 / 4.

В работе предложен метод лечения нарушения репаративного остеогенеза при повреждениях костей скелета с помощью трансплантации тканеинженерной конструкции. Для экспериментального изучения патологического процесса использовали модель ротационно-нестабильного остеосинтеза. В качестве стимулятора репаративного остеогенеза была применена тканеинженерная конструкция на основе аутологичных мультипотентных стромальных клеток из жировой ткани крыс, преддифференцированных в остеогенном направлении (по протоколу RMosteo-AT ЗАО «РеМеТэкс»).

Гистологическое исследование образцов кости, полученных от группы с трансплантацией тканеинженерной конструкции выявило образование молодой костной ткани во всем объеме трансплантата. Материал трансплантата полностью интегрирован между отломками кости и частично замещен ретикуло-фиброзной костной тканью. В группах сравнения с имплантацией материала и простым остеосинтезом образование костной ткани не выявлено.





Полученные гистологические данные продемонстрировали значительное улучшение репаративного остеогенеза в зоне перелома после 4 месяцев наблюдения.

58 Всероссийская научная школа-конференция для молодежи Использование мезенхимальных стволовых клеток костного мозга при атрофии зрительного нерва и пигментной дегенерации сетчатки Ромащенко А.Д.1, Суздальцева Ю.Г.2, Кальсин В.А.3, Ковалев А.В. Российский университет дружбы народов Российский государственный медицинский университет Центральный институт травматологии и ортопедии им. Н.Н. Приорова В рамках программы внедрения инновационных медицинских технологий нами разработан и зарегистрирован в Российском авторском обществе комплекс биомедицинских технологий «Клеточные технологии в офтальмологии» за № 15217 от 25 мая 2009 г. на основе комбинированных высокотехнологичных офтальмологических операций, включающих забор тканей костного мозга, выделение и культивирование мезенхимальных стволовых клеток костного мозга (МСК КМ), а также микрохирургическую операцию с трансплантацией клеточного материала.

Методом проточной цитофлуориметрии было установлено, что фибробластоподобные клетки, полученные в результате культивирования мононуклеарной фракции аспирата костного мозга, обладали следующим фенотипом: CD13+, CD34-, CD44+, CD45-, СD49b+, СD54+, CD90+, CD105+, CD106+-, CD117+-, HLA- ABC+-, HLA-DR-. Исследование способности клеток полученной культуры к дифференцировке показало, что в среде дифференцировки в жировую ткань МСК КМ способны активно накапливать жировые вакуоли; при культивировании в микромассе с добавлением факторов дифференцировки в хондроциты (TGF-beta) МСК КМ способны образовывать плотную оформленную структуру, характеризующуюся наличием значительного количества протеогликанового экстрацеллюлярного матрикса, содержащего коллаген 2 типа; при добавлении факторов дифференцировки в остеобласты МСК КМ способны активно накапливать фосфаты кальция в вакуолях с образованием характерных по морфологии локусов окостенения.

В целях обеспечения безопасности использования полученные МСК КМ подвергали ПЦР-анализу на отсутствие провирусной ДНК и вирусной РНК ВИЧ-1 и ВИЧ-2; РНК вируса гепатита C; ДНК вируса гепатита B;

вирусов простого герпеса 1 – 2-го типов; цитомегаловируса; вируса Эпштейн-Барр; микоплазмы; токсоплазмы.

12 пациентам в возрасте от 20 до 68 лет с атрофией зрительного нерва различного генеза (нисходящая атрофия, глаукома) и пигментной дегене59 Всероссийская научная школа-конференция для молодежи рацией сетчатки с остротой зрения от 0,01 до 0,1 после стандартного лечения, которое оказалось не эффективным, проводили микрохирургическую операцию по трансплантации 10 млн аутологичных МСК КМ ретробульбарно и в субтеноновое простанство обоих глаз. Эффективность трансплантации МСК КМ оценивали раз в месяц в течение полугода. В период наблюдения у пациентов не выявлено никаких осложнений, в то же время улучшение остроты зрения по сравнению с исходным составило от 0,до 0,7 соотвественно.

Таким образом, проведенные клинические исследования показали, что использование суспензии МСК КМ для лечения атрофии зрительного нерва и пигментной дегенерации сетчатки является единственным на сегодняшний день эффективным и патогенетически обоснованным способом лечения.

Сравнительная оценка устойчивости мезенхимальных стромальных клеток к различному содержанию кислорода в среде культивирования Рылова Ю.В., Андреева Е.Р., Буравкова Л.Б.

Учреждение Российской академии наук Государственный научный центр Российской Федерации – Институт медико-биологических проблем РАН Мезенхимальные стромальные клетки (лМСК), в связи с их высоким пролиферативным потенциалом и пластичностью, в настоящее время являются привлекательным материалом для использования в тканевой инженерии. Изменение содержания О2 внутри тканевых композитов при заселении их клетками in vitro может серьезно нарушить жизнеспособность последних. Целью данной работы являлось сравнение морфологических особенностей, иммунофенотипа, жизнеспособности и клеточного прироста лМСК, культивируемых при содержании 1%, 3%, 5% и 20% О2 в среде.

В исследовании использовали две линии лМСК, постоянно культивируемые в условиях (20%) и (5%) О2. С первого пассажа обе клеточных линии дополнительно подвергали воздействию низкого содержания О(1% и 3%). Прирост клеток после перемещения из 20% в 1% и 3% Опревышал таковой для контроля более, чем в 3 раза. Клеточный прирост при 5% О2 был в 2 раза меньше, чем после перемещения из 5% в 1% и 3% О2. В сравниваемых клеточных популяциях почти 100% клеток экспрессировали CD73. Доля лМСК, экспрессирующих CD90 не изменялась 60 Всероссийская научная школа-конференция для молодежи при снижении содержания О2 с 5% до 3% и уменьшалась в 2 раза в условиях 1% О2. При перемещении лМСК из 20 % в 1% и 3% О2 количество клеток, экспрессирующих CD90 уменьшилось практически в 2 раза. Жизнеспособность клеток при всех используемых концентрациях О2 оставалась высокой и составляла более 90%.

Таким образом, полученные данные позволяют предположить, что при использовании лМСК в тканевой инженерии, можно будет обеспечить создание биоинженерных фрагментов, заселенных клетками сохраняющими высокую жизнеспособность и пролиферативную активность.

Работа выполнена при поддержке контракта № 02.522.11.Роснауки и программы ОБН РАН.

Pages:     | 1 |   ...   | 6 | 7 || 9 | 10 |   ...   | 12 |










© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.