WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!


Pages:     | 1 || 3 | 4 |   ...   | 12 |
Создание линий iPS клеток (стволовых клеток с индуцированной плюрипотентью) из эндотелиальных клеток человека Шутова М.В., Лагарькова М.А., Честков И.В., Богомазова А.Н., Ризванов А.А., Киселев С.Л......................................... Особенности мезенхимальных клеток жировой ткани при вторичной лимфедеме Янкайте Е.В., Повещенко О.В., Ким И.И., Ульянов Е.В., Нимаев В.В., Шумков О.А., Коненков В.И......................................... Функциональная характеристика мононуклеарных клеток периферической крови после мобилизации гранулоцитарным ростовым фактором Янкайте Е.В., Ким И.И., Повещенко О.В., Хабаров Д.В., Романов А.Б., Покушалов Е.А., Коненков В.И............................... 9 Всероссийская научная школа-конференция для молодежи Биология нейральных стволовых клеток и возможности реконструкции мозга Александрова М.А.

Учреждение Российской академии наук Институт Биологии развития им. Н.К. Кольцова РАН, Москва Фундаментальные знания в области нейрогенеза значительно обогатились за последние годы в связи с открытием у млекопитающих и человека в мозге нескольких зон, где происходит постоянный нейрогенез благодаря функционированию клеток со стволовыми свойствами. В мозге нейральные стволовые клетки (НСК) существуют в течение всей жизни и их потомки — нейроны и глия, мигрируют, дифференцируются, встраиваются в нейронные сети и функционируют. Эти открытия предоставили совершенно новую научную базу для изучения регенераторных процессов в ЦНС, основу которых составляют исследования биологии стволовых клеток и их регенераторных потенций при эндогенной стимуляции или трансплантации с целью реконструкции поврежденного мозга. Нейротрансплантация малодифференцированных клеток является неоценимым инструментом для изучения роста и дифференцировки клеток нервной системы, формирования межнейрональных взаимодействий и стимуляции восстановительных процессов. НСК при трансплантации могут замещать поврежденные нейроны и стимулировать компенсаторные процессы и нейрогенез в мозге реципиента за счет выделения различных ростовых и трофических факторов. Совершенно очевидно, что источник и условия культивирования стволовых клеток являются важнейшими факторами, в значительной степени определяющими дальнейшую судьбу клеток после трансплантации, а успех этих трансплантаций складывается из способностей прогениторных клеток к переживанию в мозге реципиента, миграции, дифференцировке, интеграции и экспрессии специфических факторов. Приживление и рост нейротрансплантатов представляют собой уникальную форму реализации молекулярно-генетической программы развития, метаболизма и патологии. Расшифровка молекулярных механизмов этих процессов откроет пути для управления реконструкцией в дифференцированном мозге.Работа поддержана грантами РФФИ № 08 – 04 – 00081, Федерального агентства по науке и инновациям № 02.512.12.2008.

10 Всероссийская научная школа-конференция для молодежи Метод органотипического культивирования тканей глаза позвоночных животных как способ для изучения клеточных источников для регенерации сетчатки Новикова Ю.П., Алейникова К.С., Поплинская В.А., Григорян Э.Н.

Институт биологии развития РАН Для активации регенерационных потенций тканей глаза взрослых позвоночных за счет увеличения пролиферации и изменения фенотипа клеток мы использовали новый подход - органное ротационное культивирование in vitro изолированной сетчатки и заднего сектора глаза без сетчатки. Выбранный метод in vitro позволяет сохранять клеточное микроокружение, осуществлять долговременное культивирование, а также направленно манипулировать компонентами среды. Для сравнения пролиферативных возможностей клеток источников регенерации использованы два объекта – взрослые тритон и крыса, т.е. животные с высоким и низким потенциалом к регенерации. При культивировании ИС взрослого тритона Pl. waltl мы наблюдали миграцию клеток с периферии вовнутрь, в полость сформированных ИС сфероидов, и митозы.

Отдельные митотические фигуры были отмечены и в ядерных слоях ИС. Пролиферация клеток ИС приводила к образованию пула нейробластов, способных к дальнейшим делениям, миграции и замещению погибших нейронов.

Дополнительно проведенные иммуноцитохимические исследования позволяют отнести пролиферирующие клетки ИС тритона как к прогениторным клеткам ростовой зоны, так и клеткам макро- и микроглии. При культивировании ИС взрослой крысы, на фоне транслокации фоторецепторных клеток вовнутрь и их гибели, имела место пролиферация (BrdU метка и митозы) в наружной и внутренней областях ИС. Источником этих клеток, однако, не была как у тритона периферия сетчатки. Делящимися были макрофаги сетчатки, а также глиальные клетки, локализованные среди нейронов внутреннего ядерного слоя. При культивировании заднего сектора глаза без сетчатки ретинальный пигментный эпителий (РПЭ) тритона и крысы демонстрировал как сходства, так и отличия. При проведении сравнительного анализа морфологии, пролиферации и экспрессии клетками маркерных специфических белков выяснено, что клетки РПЭ обоих видов животных способны при вымещении приобретать макрофагальный фенотип, а оставаясь в слое экспрессировать пан-нейральные маркеры. Однако только РПЭ тритона, но не крысы был способен к образованию в ряде случаев зачатка сетчатки, состоящего из 1-2-х рядов пролиферирующих и дедиференцирующихся клеток. Разработанный нами впервые подход оказался хорошим инструментом для изучения поведения и сравнения клеток источников регенерации сетчатки у взрослых низших и высших позвоночных.



11 Всероссийская научная школа-конференция для молодежи Пути дифференцировки трансфецированных мононуклеаров пуповинной крови человека в печени крыс после частичной гепатэктомии Андреева Д.И., Газизов И.М., Калигин М.С., Йылмаз Т.С., Гумерова А.А.

Казанский государственный медицинский университет Ранее была показана возможность образования гепатоцитов из стволовых гемопоэтических клеток. Но до сих пор не ясно происходит это путем прямой дифференцировки или в процессе слияния.

Целью нашей работы было изучить дифференцировку гемопоэтических стволовых клеток пуповинной крови, трансфецированных геном зеленого флуоресцирующего белка (EGFP), в печени крыс после частичной гепатэктомии (ЧГ).

Исследование проводили на 30 белых беспородных крысах, которым после операции ЧГ в селезенку вводили 1*106 ядросодержащих клеток пуповиной крови человека, трансфецированных геном EGFP. Забор органов проводили через 2, 5, 7 суток после операции, фиксировали и заливали в парафин по стандартной методике. Парафиновые срезы печени окрашивали антителами к EGFP и СК 19 (холангиолярный маркер), а также проводили двойное окрашивание антителами к EGFP и СК 19.

При окрашивании антителами к EGFP мы обнаруживали позитивное окрашивание гепатоцитов и синусоидных клеток, а также холангиоцитов.

А иммуногистохимическое окрашивание антителами к СК 19 кроме холангиоцитов выявило еще и мелкие округлые клетки с фенотипом гепатобластов. Известно, что зрелые гепатоциты не экспрессируют данный маркер, но ранее была показана экспрессия СК 19 гепатобластами в ходе внутриутробного развития. При двойном окрашивании антителами к EGFP и СК 19 мы видели холангиоциты, экспрессирующие оба маркера и находящиеся в мелких новообразующихся протоках. Кроме того, мы обнаружили и единичные гепатобласты, которые экспрессируют как зеленый флуоресцентный белок, так и СК 19.

Таким образом, генетически модифицированные клетки пуповинной крови человека участвуют в новообразовании желчных протоков в ходе регенерации после ЧГ. Кроме того, мы показали возможность прямой дифференцировки (а не слияния) гемопоэтических стволовых клеток пуповинной крови человека в гепатоциты в печени крыс после ЧГ.

12 Всероссийская научная школа-конференция для молодежи Аутологичные костномозговые стволовые клетки в хирургическом лечении больных ишемической болезнью сердца с хронической сердечной недостаточностью Белявская Т.М.1, Скридлевская Е.А.1, Коноплянников А.Г.2, Самойленко Л.Е.1, Бугрий М.Е.1, Сергиенко В.Б.1, Веселова Т.Н.1, Колегаев А.С.1, Акчурин Р.С.ФГУ Российский Кардиологический Научно-Производственный комплекс Росздрава, Москва Медицинский Радиологический Научный центр РАМН, Обнинск В последние годы всё большее внимание привлекает новый метод — трансплантация стволовых клеток (СК). Данный метод предложен для улучшения кровоснабжения, сократимости миокарда у больных ишемической болезнью сердца (ИБС). Цель работы: Изучить безопасность и эффективность интрамиокардиальной трансплантации костномозговых стволовых клеток.

Материалы и методы: В исследование включено 16 пациентов (средний возраст 51±8 лет) с низкой сократительной функцией миокарда левого желудочка (ЛЖ) и поражением коронарных артерий, требующим хирургической реваскуляризации. Культивирование СК костного мозга проводили с применением 5-азацитидина. Интрамиокардиальные инъекции клеточной суспензии (2x108 CD34-, CD 45-, CD 117- клеток) выполняли в области рубцового поражения миокарда во время операции коронарного шунтирования.

Результаты: Не выявлено жизнеугрожающих нарушений ритма сердца.

Фракция выброса (ФВ) ЛЖ по данным ЭХО-КГ увеличилась c 28,8±6 % до 35,5±6 % (p <0,05) через 3 месяца и значимый прирост сохранился через 1 год после операции (37,7±6 %), кроме того отмечено уменьшение объёмов полости ЛЖ. Данные синхронизированной однофотонной эмиссионной томографии миокарда (СОЭКТ) с Tc99m-МИБИ коррелируют с данными ЭХО-КГ.

Выводы: Процедура имплантации костномозговых стволовых клеток в миокард ЛЖ является безопасной, оказывает благоприятное воздействие на процесс ремоделирования левого желудочка и улучшает сократительную функцию миокарда в сочетании с реваскуляризацией миокарда.

13 Всероссийская научная школа-конференция для молодежи Морфологические изменения в печени больных хроническим алкогольным гепатитом после трансплантации аутологичных стволовых кроветворных клеток Бурганова Г.Р., Абдулхаков С.Р., Титова М.А., Гумерова А.А., Йылмаз Т.С., Газизов И.М., Одинцова А.Х.,. Киясов А.П Казанский государственный медицинский университет Цирроз печени — проблема, требующая новых подходов к лечению, поскольку существующая медикаментозная терапия не является достаточно эффективной. Наиболее перспективным в настоящее время является разработка методов клеточной терапии с использованием стволовых клеток (СК).

Целью нашего исследования было оценить морфологические изменения в печени больных хроническим алкогольным гепатитом после трансплантации аутологичных стволовых кроветворных клеток. Исследования проведены в рамках программы «Развитие клеточной медицины в Республике Татарстан». Биоптаты печени 9 больных циррозом печени до и через 3 месяца после введения в чревный ствол аутологичных СК, окрашивали с антителами против альфа-гладкомышечного актина (маркер миофибробластов) и CD34. CD34 отсутствует в эндотелии синусоидов в норме и появляется в этих клетках при капилляризации синусоидов.





Результаты окрашивания оценивали полуколичественным методом.

Клетки преимущественно локализовались в перипортальных областях и в инфильтратах портальных трактов. Через 3 месяца после трансплантации уменьшается количество миофибробластов в паренхиме печени, исчезает перисинусоидальный фиброз. На этом фоне эндотелий перестает экспрессировать CD34 и приобретает свойственный ему в норме фенотип.

Полученные нами данные позволяют сделать вывод, что трансплантация аутологичных гемопоэтических стволовых клеток в чревный ствол больных хроническим гепатитом в стадии цирроза является безопасной процедурой, способствует уменьшению фиброза и восстановлению эндотелия синусоидов.

14 Всероссийская научная школа-конференция для молодежи Регенерация трубчатой кости при введении суспензии ММСК Буравкова Л.Б., Капланский А.С., Андреева Е.Р., Валюшкина М.П., Дурнова Г.Н., Логинов В.И., Анохина Е.Б.

Группа клеточной физиологии, лаборатория морфологии ГНЦ РФ-Институт медико-биологических проблем РАН, Москва В настоящее время вызывает интерес возможность использования клеточной инженерии, как способа улучшения восстановления функциональной активности при различных повреждениях опорно-двигательного аппарата. Целью нашей работы было установить влияние однократного введения мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток (ММСК) костного мозга, культивированных при различном содержании кислорода, на параметры посттравматического остеогистогенеза.

Работа была выполнена на 60 крысах-самцах линии Вистар, которые были разделены на 4 группы в зависимости от воздействия после перелома:

1 — контроль, без дополнительных воздействий (группа К1), 2 — введение в зону повреждения культуральной среды без факторов роста (группа К2), 3 — введение суспензии (0,25 мл, 5·105 ММСК) (О1) клеток, культивированных в стандартных условиях, 4 — введение такого же количества ММСК, культивированных при 5 % кислорода (О2).

При гистоморфометрическом анализе групп О1 и О2 через 14 суток после операции выявлено достоверно большее значение коэффициента утолщения костной мозоли (КУ-КМ) в 1,2 – 1,3 раза по сравнению с группой К1 за счёт объёма хряща. Через 30 суток после операции в группах Ои О2 значения КУ-КМ были в 0,17 и 0,24 раза меньше чем в группе К1 (р <0.05). Сравнение костной мозоли на 14-е и 30-е сутки после перелома выявило значительное уменьшение КУ в группах О1 и О2 (на 50 % и 52 % соответственно). В группах К1 и К2 уменьшение КУ составило 24 % и 36 % соответственно.

Таким образом, продемонстрирована эффективность введения аллогенных ММСК костного мозга при регенерации перелома трубчатой кости.

Работа выполнена при поддержке контракта № 02.522.11.2006 / Роснауки 15 Всероссийская научная школа-конференция для молодежи Современный подход к тестированию клеточных препаратов Лобынцева Г.С.1, Дзюблик И.В.2, Трохименко Е.П.2, Ворожка И.В. Институт клеточной терапии, Киев Национальная медицинская академия последипломного образования, Киев Использование клеточных препаратов в медицине требует разработки протоколов, сочетающих в себе безопасность и эффективность применения.

Одним из методов, обеспечивающих безопасность, является тестирование образцов на присутствие инфекционных агентов. Для проведения исследования были взяты суспензии кроветворных клеток, выделенные из эмбриональной печени 6 – 12 недель гестации. Тестирование методом ПЦР на наличие возбудителей инфекционных заболеваний, которые отнесены к TORCH-инфекциям (гепатиты В и С, герпетические инфекции, токсоплазмоз, краснуха, сифилис, хламидиоз, уреаплазмоз, микоплазмоз) показало отрицательный результат. При морфологическом анализе препаратов была обнаружена токсическая зернистость в цитоплазме моноцитов, чрезмерная их вакуолизация и наличие клеток нейтрофильного ряда, что косвенно указывало на присутствие в тестированных образцах патогенов. Для выявления предполагаемых инфекционных агентов использовали методику изучения цитопатического действия (ЦПД) клеточных препаратов (8 образцов) на перевиваемые культуры клеток.

Были взяты культуры клеток с высокой чувствительностью к современным возбудителям: HEP-2, VERO, ПТП, L-929. Каждый материал тестировали в 5 повторностях. Проведено 3 пассажа с интервалом культивирования в одном пассаже 120 ч. Контроль состояния монослоя проводили с помощью инвертированного микроскопа и фотосъемки. Во всех исследуемых образцах через 12 часов культивирования было выявлено специфическое ЦПД, проявляющееся в разрушении монослоя культуры клеток, образовании симпластов и круглоклеточной дегенерации. Полученные данные свидетельствуют о наличии в опытных образцах патогенов, которые не входят в перечень возбудителей инфекционных заболеваний, определяемых нами методом ПЦР.

Данное исследование показало необходимость изучения ЦПД при тестировании клеточных препаратов для определения маркеров возбудителей. Накопление возбудителя в культуре даст возможность его идентифицировать, определить патогенность и изучить особенности антигенной структуры.

16 Всероссийская научная школа-конференция для молодежи Активация стволового компартмента в печени крыс после частичной гепатэктомии и трансплантации клеток пуповинной крови человека Газизов И.М., Андреева Д.И., Калигин М.С., Йылмаз Т.С., Гумерова А.А., Киясов А.П.

Казанский государственный медицинский университет Целью нашего исследования было изучение экспрессии С-kit в печени крыс после частичной гепатэктомии с интраоперационным введением клеток мононуклеарной фракции пуповинной крови человека.

Pages:     | 1 || 3 | 4 |   ...   | 12 |










© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.