WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!


Pages:     | 1 |   ...   | 10 | 11 ||

Красноярский государственный медицинский университет Недавние работы показали возможность получения половых клеток из эмбриональных стволовых клеток (ЭСК) различных животных и человека.

Это дает предпосылки к разработке новейших методов лечения бесплодия связанного с нарушениями гаметогенеза. Для направленной дифференцировки ЭСК в половые необходимо понимание процессов, протекающих на различных стадиях образования гамет. С связи с этим необходима разработка методов получения первичных половых клеток (ППК) в культуральных средах без компонентов животного происхождения. Целью настоящей работы было исследование динамики экспрессии маркеров первичных половых клеток в ЭСК человека при их культивировании в среде обогащенной факторами дифференцировки в условиях отсутствия фидерных клеток и сыворотки.

ЭСК человека 49-ой линии культивировались среде обогащенной морфогенетическим белком 4 (BMP4), эпидермальным фактором роста (EGF), ретиноевой кислотой, фолликулостимулирующим и лютеинезируещим гормонами. Культивирование клеток проводилось в течение четырех недель. Для идентификации прохождения клетками стадий дифференцировки, каждые 3 дня осуществлялся забор клеток для проведения обратной транскрипции и ПЦР для анализа экспрессии следующих маркеров: Oct4, ifitm3, DPPA3, DDX4, ZP3.

83 Всероссийская научная школа-конференция для молодежи В ходе исследования было показано, что OCT4 стабильно экспрессируется до третей недели культивирования, и затем постепенно исчезает к концу срока проведения эксперимента. Ген DPPA3 интенсивно экспрессировался со второй недели культивирования, и постепенно уровень экспрессии снижался к третей недели. IFITM3 стабильно присутствует во всех клетках в ходе дифференцировки. DDX4 и ZP3 в ходе эксперимента не экспрессировались. Полученные данные могут свидетельствовать о том, что в ходе дифференцировки ЭСК человека вступали в начальную стадию образования ППК, но затем из-за нестабильных условий изменяли ход дифференцировки.

Создание линий iPS клеток (стволовых клеток с индуцированной плюрипотентью) из эндотелиальных клеток человека 1 1 1 Шутова М.В., Лагарькова М.А. 2, Честков И.В. 1, Богомазова А.Н., Ризванов А.А., Киселев С.Л.

Институт общей генетики им. Н.И. Вавилова РАН Казанский государственный медицинский университет Индуцированные плюрипотентные клетки (iPS) впервые были получены и охарактеризованы японским исследователем Яманака в 2006 году (Takahashi & Yamanaka, 2006). Он предложил использовать этот термин для клеток, полученных в результате индукции соматических клеток в плюрипотентное состояние путем их генетической модификации. В настоящее время iPS клетки получены из многих клеток мыши, однако для человека эффективное репрограммирвоание было проведено только на трех типах клеток: фибробластах кожи, кератиноцитах, и клетках крови. Таким образом, в задачи исследования входило создать методику получения iPS клеток из клеток эндотелия человека. В нашей работе была использована первичная культура клеток эндотелия пупочной вены человека (HUVEC).

Мы выбрали для репрограммирования эндотелиальные клетки из-за их легкой доступности, максимально неизмененного генома (нарушения могут происходить из-за длительного культивирвания и воздействий кружающей среды in vivo), и отсутствия необходимости проводить специальную селекцию полученных iPS клонов. В клетки HUVEC с помощью лентивирусной системы доставки были введены четыре гена транскрипционных факторов:

Klf4, Sox2, Oct3 / 4, c-Myc. Эти гены используются в большинстве исследований по индукции соматических клеток в плюрипотентное состояние.

84 Всероссийская научная школа-конференция для молодежи На пятый день после инфекции клетки пересевались, на шестой среда менялась на среду для эмбриональных стоволовых клеток (ЭСК) человека.

На 16 день появлялись первые колонии, на 20 – 25 день они пересевались и проводился морфологический, молекулярно-генетический и функциональный анализ. В результате экспериментальной работы было отобрано 9 независимых клонов. Они были охарактеризованы методами ОТ-ПЦР анализа, анализа кариотипа и иммуноцитохимического анализа. Анализы показали, что во всех клонах начался процесс репрограммирования. Полученные клоны были способны образовывать эмбриоидные тельца и дифферецироваться в клетки трех зародышевых листков, что подтверждает их плюрипотентный статус. В результате нашей работы из клеток HUVEC были получены независимые линии iPS клеток.

Особенности мезенхимальных клеток жировой ткани при вторичной лимфедеме Янкайте Е.В., Повещенко О.В., Ким И.И., Ульянов Е.В., Нимаев В.В., Шумков О.А., Коненков В.И.

ГУ НИИ Клинической и экспериментальной лимфологии СО РАМН, Новосибирск Жировая ткань является источником мезенхимальных стволовых клеток (МСК).

Целью настоящей работы явилась разработка эффективной методики забора и метода культивирования МСК жировой ткани, характеристика полученных клеток и сравнительный анализ полученных данных в норме и при вторичной лимфедеме.

В результате исследования было выяснено, что наиболее эффективным методом забора жировой ткани, как при лимфедеме, так и в норме, является липоаспирация (липосакция). Установлено, что количество выделенных МСК в норме составляет 0,4 – 0,5х106 клеток из 1 мл жира в ранние сроки и 0,2 – 0,3х106 клеток через 18 часов после липоаспирации, при лимфедеме — на 10 % больше. Оптимальной плотностью клеток при культивировании является 0,5х103 / см2. Динамика роста клеток, выделенных из жира при вторичной лимфедеме, несколько превышает динамику роста клеток нормальной жировой ткани.

Сроки образования субконфлюентного слоя в норме и при лимфедеме 9 – 11 суток при 0 пассаже, 6 – 8 суток при 2 – 3 пассажах. На ранних пас85 Всероссийская научная школа-конференция для молодежи сажах преобладают мелкие клетки, к 5 пассажу культуры представлены гомогенной популяцией одноядерных фибробластоподобных веретеновидных клеток, иногда с небольшим количеством отростков. При лимфедеме размеры клеток крупнее, а количество отростков больше.

Большинство выделенных из нормальной жировой ткани и при лимфедеме клеток имеют фенотип CD73+СD90+CD3-CD14-CD19-CD45-. Также выявлена экспрессия в свежевыделенных клетках фенотипического маркера гемопоэтических стволовых клеток CD34.

Таким образом, жировая ткань является доступным в плане забора и выделения источником МСК для тканевой регенерации и репарации.

Функциональная характеристика мононуклеарных клеток периферической крови после мобилизации гранулоцитарным ростовым фактором Янкайте Е.В.*, Ким И.И.*, Повещенко О.В.*, Хабаров Д.В.*, Романов А.Б.**, Покушалов Е.А.**, Коненков В.И.* *НИИ КЭЛ СО РАМН, Новосибирск, Россия ** ФГУ «ННИИ патологии кровообращения им. ак. Е.Н Мешалкина Федерального агентства по высокотехнологичной медицинской помощи», Новосибирск В последнее время развивается новое терапевтическое направлениеимплантация стволовых клеток, позволяющее инициировать рост новых мышечных волокон и развитие неоангиогенеза в участках повреждения миокарда. Альтернативным источником костному мозгу является периферическая кровь после мобилизации ростовыми факторами.

Целью нашего исследования явился фенотипический и функциональный анализ мононуклеарных клеток периферической крови после мобилизации G-CSF (Грасальва) стволовых клеток из костного мозга у больных ишемической болезнью сердца.

Проведенные исследования показали увеличение CD34+ стволовых клеток в сепарированной крови при мобилизации в среднем на 79 %. Количество маркеров иммунокомпетентных клеток (CD45+, CD14+, CD3+, CD4+, CD8+, CD19+, CD16+) при фенотипировании значительно не менялось после мобилизации. Количество клеток в S / M фазах клеточного цикла составило около 10 % после мобилизации и 2 % до введения G-CSF.

Мононуклеарные клетки имели высокую жизнеспособность (99 %), низ86 Всероссийская научная школа-конференция для молодежи кую апоптотическую активность (2 % при определении клеточного цикла и менее 1 % CD95+ клеток), активно реагировали на стимуляцию митогеном (МТТ-тест). Определение количества цитокинов в супернатантах мононуклеарных клеток на уровне спонтанной продукции выявило достаточно большой спектр из различных функционально значимых групп, а при митогенной стимуляции конканавалином А показало значимый прирост цитокинов (ФНО-, ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-5, ИЛ-10, ИЛ-12, ИЛ-13, ИФН-, ГМ-КСФ).

Таким образом, периферическая кровь после мобилизации является эффективным источником для клеточной трансплантации.

87 Всероссийская научная школа-конференция для молодежи 88 Всероссийская научная школа-конференция для молодежи

Pages:     | 1 |   ...   | 10 | 11 ||










© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.