WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!


Pages:     | 1 |   ...   | 8 | 9 || 11 | 12 |

Через 4 нед после трансплантации наблюдалось снижение доли погибших ППМВ. Доля ППМВ без центрально расположенных ядер достоверно возрастала, начиная с 8 нед. Доля ППМВ, содержащих дистрофин, достоверно увеличивалась по сравнению с контролем только начиная с 16 нед. Также происходило изменение структуры НМС. Через 4 нед после трансплантации в мышцах мышей mdx площадь НМС на поперечных срезах мышц увеличилась с 78,4±5,1 мкм2 до 106,9±3,4 мкм2, что соответствует площади НМС нормальных мышей C57BL / 6 – 102,8±3,0 мкм2. На продольных срезах мышц через 4 нед было зарегистрировано увеличение площади отдельных кластеров АХР, составляющих НМС, с 58,0±3,9 мкм2 до 80,0± 4,9 мкм2. Одновременно происходило уменьшение количества этих кластеров с 4,7±0,3 до 3,7±0,1. Через 16 нед после трансплантации наблюдалось увеличение количества кластеров АХР, составляющих НМС, с 3,до 4,7, и их размеров до 93,9±4,6 мкм2. При этом произошло значительное увеличение общей площади НМС до 666,0±46,1 мкм2, достоверно превосходящей величину характерную для НМС дикого типа — 403,8±77,1 мкм2.

68 Всероссийская научная школа-конференция для молодежи Таким образом, Lin (-) СККМ дикого типа вызывают изменение структуры НМС скелетных мышц у мутантных мышей mdx, приближая её к структуре НМС ППМВ мышей С57Bl / 6. Работа выполнена при финансовой поддержке РФФИ, гранты 05 – 04 – 49609, 06 – 04 – 08388офи, и контракта ГК № 02.512.11.2219 Федерального агентства по науке и инновациям.

Результаты применения трансмиокардиальной лазерной реваскуляризации (ТМЛР) в сочетании с трансплантацией аутологичных мезенхимальных стволовых клеток костного мозга у повторных больных ИБС с диффузным поражением коронарного русла Бокерия Л.А., Беришвили И.И., Солнышков И.В., Вахромеева М.Н.

НЦ ССХ им. А.Н. Бакулева РАМН, Москва Повторные операции у больных ИБС с возвратом стенокардии сопровождаются высокой летальностью и высокой частотой осложнений. В работе представлены результаты ТМЛР в сочетании с трансплантацией аутологичных мезенхимальных стволовых клеток костного мозга, выполненных в качестве повторного вмешательства у больных ИБС с поражением дистального русла.

Цель исследования: изучить результаты выполнения альтернативных методов лечения у повторных больных.

Материалы и методы: В исследование включены повторные больные, оперированные в Институте коронарной и сосудистой хирургии НЦ ССХ им. А. Н. Бакулева за период с июня 2005 года по настоящее время. Всем больным была выполнена трансмиокардиальная лазерная реваскуляризация (ТМЛР) в сочетании с введением аутологичных мезенхимальных стволовых клеток. В 2-х случаях была выполнена только ТМЛР с введением стволовых клеток, а в 2-х случаях — ТМЛР с введением стволовых клеток в сочетании с миниинвазивной реваскуляризацией миокарда (МИРМ).

Методы исследования включали в себя ЭКГ, ВЭМ, ЭхоКГ исследование, а также изучение данных перфузии миокарда с помощью синхронизированной с ЭКГ однофотонной эмиссионной компьютерной томографии миокарда ЛЖ (синхро-ОФЭКТ). Все больные обследованы с помощью анкет качества жизни SF-36. Приводим результаты обследования больных в сроки до 1 года и более.

Результаты: Мы не имели летальных исходов ни на госпитальном этапе, ни в отдалённые сроки. За анализируемый период не было случаев жиз69 Всероссийская научная школа-конференция для молодежи неугрожающих нарушений ритма сердца, повторных инфарктов миокарда, возвратов стенокардии и регоспитализаций. Достоверно снизился ФК стенокардии с 3,25 до 0,33 через 12 месяцев после операции (p=0,0001) и среднесуточная потребность в нитроглицерине с 4,5 до 0,25 (p=0,01).

Общая ФВ ЛЖ увеличилась недостоверно [как при нагрузке (с 41,5 % до 45,5 %; p=0,85), так и в покое (с 53 % до 58 %; p=0,5) ], очевидно из-за малого числа наблюдений. Толерантность к физической нагрузке достоверно увеличилась с 75Вт до 115,6Вт (р=0,003). Физическое и психо — эмоциональное состояние больных достоверно улучшились (с 38,1 до 77,5;

p=0,03; и с 42,7 до 81,1; p=0,004 соответственно). Выявлено достоверное снижение ФК стенокардии, среднесуточной потребности в нитроглицерине и улучшение толерантности к физической нагрузке и качества жизни.

Выводы: использованная нами методика лечения повторных больных с диффузным поражением коронарных артерий представляется вполне жизнеспособной альтернативой в группе пациентов, у которых выполнение повторного АКШ сопровождается высокой летальностью и высокой частотой осложнений. Сказанное не может быть отнесено к больным с критической массой рубцово-измененного миокарда без достоверных зон гибернированного миокарда.

Старение вызывает подавление ангиогенных свойств стромальных клеток жировой ткани Старостина Е.Е., Ефименко А.Ю., Калинина Н.И., Парфенова Е.В., Ткачук В.А.

Факультет Фундаментальной Медицины МГУ им. М.В. Ломоносова Введение. Среди мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток взрослого организма стромальные клетки жировой ткани (СКЖТ) считаются одними из самых перспективных для применения в клеточной терапии. Было показано, что они обладают способностью стимулировать рост кровеносных сосудов, в том числе путем секреции ангиогенных факторов роста. Однако различные факторы, включая возраст пациентов, могут оказывать влияние на их функциональные свойства. Поэтому целью нашей работы было оценить влияние возрастного фактора на пролиферацию, жизнеспособность и ангиогенную активность СКЖТ.

Материалы и методы. СКЖТ были выделены из жировой ткани мышей линии BalB/с, возраст животных составлял 2 месяца (СКЖТмол, 70 Всероссийская научная школа-конференция для молодежи n = 9) или 18 месяцев (СКЖТстар, n = 9). Клетки культивировали до 2 пассажа. Затем в течение 48 часов их выращивали в условиях 1 % (гипоксия) или 20 % (нормоксия) содержания кислорода. Пролиферацию клеток оценивали с помощью коммерческого МТТ теста (Invitrogen). Длину теломер определяли с помощью полимеразной цепной реакции в реальном времени. Жизнеспособность клеток оценивали с помощью проточной цитофлуорометрии по связыванию аннексина-V и накоплению 7-аминоактиномицина D. Анализ изменения экспрессии генов проводили методом полимеразной цепной реакции в реальном времени. Ангиогенную активность суммарных продуктов секреции клеток оценивали по влиянию кондиционированной среды (КС) на образование капилляроподобных структур эндотелиальными клетками (HUVEC) на Матригеле in vitro.



Результаты. CКЖТ старых животных обладают в 2 раза меньшим пролиферативным потенциалом по сравнению с клетками молодых животных.

Длина теломер у клеток старых животных была в 3 раза меньше по сравнению с СКЖТ молодых мышей. Более того, в популяции СКЖТ старых животных доля клеток, находящихся на разных стадиях апоптоза была в 3 раза больше по сравнению с клетками молодых животных. Содержание мРНК фактора роста эндотелия сосудов (VEGF), плацентарного фактора роста (PlGF) было статистически значимо больше в СКЖТмол, в то время как уровень фактора роста гепатоцитов (HGF) был выше в СКЖТстар.

Гипоксия приводила к выравниванию содержания мРНК HGF в СКЖТмол и СКЖТстар. Экспрессия антиангиогенных факторов эндостатина и тромбоспондина значимо не отличалась в клетках от животных разного возраста и в схожей степени снижалась в гипоксических условиях. Наблюдалось статистически значимое повышение факторов системы урокиназы (урокиназа, рецептор к урокиназе, металлопротеиназы 2 и 9 типов, ингибитор активатора плазминогена-1) в СКЖТстар по сравнению с СКЖТмол как в нормоксических, так и в гипоксических условиях. Суммарная длина капилляроподобных структур, образованных HUVEC на Матригеле в присутствии КС от СКЖТмол, была статистически значимо больше, чем от СКЖТстар, что свидетельствует о более выраженной секреции ангиогенных факторов клетками молодых животных. В клетках, культивированных в условиях гипоксии, способность стимулировать образование таких структур повышалась в равной степени.

Таким образом, при старении происходит подавление пролиферативной активности и жизнеспособности стромальных клеток жировой ткани, а также продукции ангиогенных факторов этими клетками. Однако стимуляция ангиогенного потенциала клеток под действием гипоксии не зависит 71 Всероссийская научная школа-конференция для молодежи от возраста, что указывает на то, что культивирование клеток перед трансплантацией в условиях пониженного содержания кислорода может повышать эффективность клеточной терапии.

Циркулирующие прогениторные клетки в условиях стимуляции ангиогенеза у больных с хронической ишемией нижних конечностей Талицкий К.А., Булкина О.С., Арефьева Т.И., Воробьева О.Н., Балахонова Т.В., Самко А.Н., Филатов Д.Н., Елисеев А.О., Кухарчук В.В., Парфенова Е.В., Карпов Ю.А.

Российский кардиологический научно-производственный комплекс МЗ РФ Введение. Терапевтический ангиогенез — перспективный метод лечения для пациентов с хронической ишемией нижних конечностей, не являющихся кандидатами для реваскуляризации. Значительную роль в развитии ангиогенного эффекта терапии отводят эндотелиальным клеткам-предшественникам, в связи с чем представляет интерес оценить динамику уровней циркулирующих клеток-предшественников (ЦКП) при стимуляции ангиогенеза в клинических условиях.

Материалы и методы. 20 больных 50–76 лет с хронической ишемией нижних конечностей атеросклеротического происхождения (Fontaine IIb-IV) были рандомизированы в группы генной терапии (ГТ), клеточной терапии (КТ), либо в группу контроля (К). В группе ГТ больным в ишемизированные мышцы конечностей вводили плазмидную ДНК, включающую кодирующую часть гена фактора роста эндотелия сосудов (VEGF-165).

В группе КТ больным вводили аутологичную мононуклеарную фракцию крови, полученную путем афереза после мобилизации нейпогеном. Больные контрольной группы получали стандартную терапию. Всем больным проводились сеансы тренировочной ходьбы на тредмиле. Содержание ЦКП оценивалось с помощью поточной цитометрии на основании фенотипа CD45-CD34+CD133+.

Результаты. Через 1 месяц в группе КТ у одной больной с к ритической ишемией конечности наблюдалось заживление трофической язвы. В группах ГТ и КТ отмечено увеличение показателей перфузии конечностей, дистанции безболевой ходьбы и числа видимых коллатералей, повышение уровня физической активности по данным опросника. Серьезных осложнений зарегистрировано не было. Исходный уровень ЦКП значительно 72 Всероссийская научная школа-конференция для молодежи снижен у всех больных. Процедуры ГТ и КТ сопровождались достоверным повышением уровня ЦКП, более выраженным в группе КТ, которое сохраняется не менее 3 месяцев после лечения и коррелирует с уровнем перфузии конечности.

Влияние аллогенных мезенхимальных стволовых клеток костного мозга на чувствительность лейкемических клеток к противолейкемическим препаратам in vitro Татаринова О.С., Осипова Е.Ю. Румянцев С.А.

Лаборатория регуляции кроветворения отдела молекулярной и экспериментальной гематологии, онкологии и иммунологии ФНКЦ ДГОИ Росздрава Введение: Метод трансплантации мезенхимальных стволовых клеток (МСК) из костного мозга доноров используется в клинической практике для ускорения приживления кроветворных предшественников и для профилактики и терапии иммунологических осложнений аллогенной трансплантации гемопоэтических клеток-предшественников, которая чаще всего применяется для лечения злокачественных гематологических заболеваний:





острых и хронических лейкозов. Согласно данным литературы, МСК различных культуральных линий могут снижать чувствительность лейкозных клеток к химиотерапии in vitro, которая является важным прогностическим фактором при лечении больных лейкозами.

Цель исследования: определение влияния аллогенных мезенхимальных стволовых клеток доноров на чувствительность лейкозных клеток пациентов к противолейкемическим препаратам in vitro.

Материалы: 1) Лейкемические клетки, выделенные из костного мозга пациентов детского возраста с острыми лейкозами, в соответствии с диагнозом разделенные на 3 группы. 2) Мезенхимальные стволовые клетки из костного мозга здоровых доноров.

Методы: МТТ-анализ по методике лаборатории онкогематологии и иммунологии госпиталя Свободного Университета Амстердама с модификациями. В ходе эксперимента производили инкубацию лейкозных клеток костного мозга с химиопрепаратами: цитарабином, даунорубицином и метилпреднизолоном в различных разведениях, — на подложке из МСК и без подложки из МСК. В последующем рассчитывали полулетальную концентрацию для каждого препарата. Между чувствительностью лей73 Всероссийская научная школа-конференция для молодежи козных клеток к химиопрепаратам и полулетальной концентрацией этих препаратов существует обратно пропорциональная зависимость. Помимо этого, производилась оценка выживаемости лейкозных клеток, культивируемых с МСК без добавления препаратов, выживаемость измерялась в процентах.

Результаты: имелась тенденция к снижению чувствительности В-лейкозных клеток и миелоидных клеток под действием МСК к цитарабину и даунорубицину, повышению чувствительности В-лейкозных клеток и снижению чувствительности миелоидных клеток к метилпреднизолону под действием МСК. Выживаемость всех групп лейкозных клеток под действием МСК повышалась.

Заключение: мезенхимальные стволовые клетки способны оказывать влияние на чувствительность лейкозных клеток к противолейкемическим препаратам и повышать выживаемость лейкозных клеток.

Локализация пероксида водорода в клетке при активации тирозинкиназных рецепторов Тюрин-Кузьмин П.А.1, Сафронова Н.М.2, Воротников А.В.1, Белоусов В.В.Факультет фундаментальной медицины Московского государственного университета имени М.В. Ломоносова 2 Институт биоорганической химии им. акад. М.М.Шемякина и Ю.А.Овчинникова РАН, Москва Ростовые факторы EGF и PDGF регулируют деление мезенхимальных клеток-предшественников из жировой ткани. Пероксид водорода (Н2О2) играет ключевую роль во внутриклеточном проведении сигнала от тирозинкиназных рецепторов (RTK), в том числе EGFR и PDGFR. Мы исследовали механизм образования и внутриклеточную локализацию Н2О2 при стимуляции RTK. Для этого мы использовали 3Т3 фибробласты, экспрессирующие преимущественно PDGFR, и эпителиальные клетки HeLа, содержащие преимущественно EGFR.

Целью нашей работы было изучение внутриклеточной локализации и диффузии Н2О2, синтезируемого NADPH оксидазой при стимуляции RTK в модельных системах для PDGFR (фибробласты 3Т3) и EGFR (эпителиальные клетки HeLа). Мы изготовили набор вариантов биосенсора HyPer, имеющих различную внутриклеточную локализацию. Генетически-кодируемый 74 Всероссийская научная школа-конференция для молодежи биосенсор HyPer обладает высокой чувствительностью и специфичностью к Н2О2, изменяя спектр возбуждения флуоресценции при взаимодействии с последним. Полученные варианты биосенсора мы экспрессировали в клетках и наблюдали за изменением их спектральных характеристик с помощью флуоресцентной микроскопии в реальном времени. Изменения уровня Н2Орассчитывали по соотношению пиков спектра возбуждения флуоресценции биосенсора, которое не зависит от уровня экспрессии биосенсора.

Мы обнаружили, что при стимуляции эпителиальных клеток EGF Н2Осинтезируется NADPH оксидазой, которая расположена в клатриновых эндосомах, содержащих интернализованный EGFR. Около плазматической мембраны уровень Н2О2 практически не изменяется, что свидетельствует о том, что Н2О2 в клетке выделяется локально и не распространяется по всей цитоплазме. Напротив, в фибробластах, после их стимуляции PDGF, Н2О2 синтезируется, в основном, вблизи плазматической мембраны. В обоихслучаях Н2О2 продуцируется также на мембране эндоплазматического ретикулума.

Таким образом, полученные нами данные позволяют утверждать, что при стимуляции RTK ростовыми факторами Н2О2 продуцируется и действует локально в отдельных компартментах клетки. Диффузия Н2О2 между компартментами клетки ограничена. Использование разработанных биосенсоров удобно для изучения динамики сигнальных каскадов в одиночных клетках гетерогенных культур клеток-предшественников.

Влияние генерации активных форм кислорода в мезенхимных стромальных клетках на состояние митохондрий и лизосом Ударцева О.О., Андреева Е.Р., Буравкова Л.Б.

Учреждение РАН государственный научный центр Институт медико-биологических проблем, Москва Ранее мы показали, что культивирование мезенхимных стромальных клеток (МСК) в среде с пониженным содержанием О2 приводит к повышению уровня активных форм кислорода (АФК). Известно, что высокие концентрации АФК обладают цитотоксическим действием. В настоящей работе мы исследовали влияние повышения уровня АФК, индуцированного фотодинамическим воздействием (ФДВ), на состояние митохондрий и лизосом МСК, культивируемых при различном содержании О2 в среде.

Pages:     | 1 |   ...   | 8 | 9 || 11 | 12 |










© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.